Биотехнологическое получение секретируемой микромицетом Aspergillus ochraceus ВКМ-F4104D протеазы-активатора протеина С плазмы крови

Защита состоится 20 сентября 2022 года в 15:30 в совете МГУ.015.2(МГУ.03.13) МГУ имени М.В. Ломоносова, биолого-почвенный корпус, ауд. 389

Кандидатская диссертация по специальности 1.5.6. Биотехнология (биол. науки)

Соискатель: Комаревцев С.К.

Научные руководители: Мирошников К.А., д.х.н., член-корр. РАН, Осмоловский А.А., к.б.н., МГУ имени М.В. Ломоносова

Организации, в которой выполнялась работа: МГУ имени М.В. Ломоносова, ИБХ РАН

Оппоненты: Калебина Т.С., Кураков А.В., Синеокий С.П.

Аннотация:

Диссертация посвящена исследованию способов биотехнологического получения секретируемой микромицетом Aspergillus ochraceus BKM-F4104D протеазы-активатора протеина С плазмы крови. В рамках работы показана возможность многократного использования иммобилизированного в полимерных гранулах продуцента для получения целевого фермента, выявлены увеличенная интенсивность его образования при иммобилизации, а также повышенная стабильность самого продуцента по сравнению с традиционным глубинным культивированием. Разработан трехстадийный способ хроматографической очистки целевой протеазы из культуральной жидкости продуцента. Установлена и проанализирована последовательность гена исследуемой протеазы, показана ее принадлежность к группе протеиназы-К-подобных субтилизиновых протеаз. Установленная последовательность депонирована в международной базе данных NCBI GenBank под номером MW183406. В результате бактериальной экспрессии и последующей хроматографической очистки была получена функционально активная форма фермента, идентичная образуемой микромицетом A. ochraceus ВКМ-F4104D, изучены особенности ее фолдинга и созревания.

 

Научная работа